Cinkujj fehérjék módosítása – alkalmazási lehetőségek

Hajdu, Bálint (2018) Cinkujj fehérjék módosítása – alkalmazási lehetőségek. Masters, Szegedi Tudományegyetem.

PDF 2018_Hajdu_Bálint_HT54NU_SZ.pdf Hozzáférés joga: SZTE designated computers only Download (2MB)

Abstract

Napjainkban jelentős erőforrásokat fordítanak genetikai eredetű (öröklődő, illetve rákos) betegségek gyógyításának kutatására. Ilyen célokra elsősorban specifikus mesterséges nukleázokat alkalmaznak, amelyek optimális működés esetén csak a kiválasztott DNS szekvenciát hasítják el. A jelenleg ismert nukleázok azonban citotoxikus hatással is rendelkeznek, így fontos további fejlesztésük. A cinkujj fehérjék moduláris felépítésűek, és képesek különböző hosszúságú DNS szekvenciák felismerésére. Ezeket összekapcsolva egy endonukleázzal specifikus DNS hasítás idézhető elő. A szakirodalomban már jól jellemzett ATCUN motívum Cu(II) vagy Ni(II) komplexe képes lehet DNS-hasítást előidézni. Korábbi kutatásaink során sikerült kialakítani egy N-terminális ATCUN motívumot tartalmazó cinkujj fehérjét Ni(II)-indukált peptidhidrolízis révén. Jelen munkámban arra kerestem a választ, hogy az így létrejött fehérje alkalmas lehet-e egy mesterséges metallonukleáz szerepére, melyben a cinkujj egységek specifikusan felismerik a DNS-t, majd a fehérje N-terminális ATCUN motívuma elhasítja azt. Ennek kiderítésére elsőként optimalizáltam a reakciókörülményeket, és agaróz gélelektroforézis segítségével megvizsgáltam az egyes komponensek kölcsönhatását DNS-sel. Cirkuláris dikroizmus spektroszkópiával, ICP-tömegspektrometriával és izoterm kalorimetriás titrálásokkal tanulmányoztam a cinkujj fehérjénk fémkötő sajátságait. Géleltolódási vizsgálatokat felhasználva megállapítottam, hogy a fehérjénk képes specifikusan felismerni DNS célszekvenciáját. A korábban előállított cinkujj fehérje-Ni(II) komplex mellett alternatív útvonalon sikerült kialakítanom a fehérje Cu(II) komplexét is, amelyről igazoltam, hogy felhasználható DNS hasítási kísérletekben, mivel akár több napon keresztül is stabilis. Végezetül a fehérjefémkomplexekkel megvalósítottam plazmid DNS hasítását is, amely bizonyos mértékű szelektivitást mutat, de ennek egyértelmű igazolásához és optimalizálásához további kísérletekre lesz szükség a későbbiekben. Mindemellett diplomamunkámban egy kolicin-alapú cinkujj fúziós fehérjét felhasználva bemutatom, hogy a Ni(II)-indukált peptidhidrolízis alkalmas lehet allosztérikusan gátolt metallonukleázok aktiválására is.

English title

Modification of zinc finger proteins – application possibilities

Institution

Szegedi Tudományegyetem

Faculty

Faculty of Science and Informatics

Department

Szervetlen és Analitikai Kémiai Tanszék

Discipline

Natural Sciences

Specialization

vegyész

Supervisor(s)

Item Type:	Thesis (Masters)
Uncontrolled Keywords:	cinkujj fehérje, ATCUN motívum, gélelektroforézis, Cirkuláris Dikroizmus spektroszkópia
Subjects:	01. Natural sciences
Depositing User:	TTIK szerkesztő
Date Deposited:	2019. Sep. 27. 10:04
Last Modified:	2019. Oct. 14. 07:07
URI:	https://diploma.bibl.u-szeged.hu/id/eprint/73256

Actions (login required)

View Item